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酶標(biāo)儀在鈣離子通道檢測方面的應(yīng)用

更新時間:2017-03-17      點擊次數(shù):4956
   酶標(biāo)儀是一種精密的光學(xué)儀器,因此良好的工作環(huán)境不僅能確保其準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性,還能夠延長其使用壽命。根據(jù)DINVDE0871條例,儀器應(yīng)放置在無磁場和干擾電壓的位置。依據(jù)DIN45635-19條例:   儀器應(yīng)放置在低于40分貝的環(huán)境下。   為延緩光學(xué)部件的老化,應(yīng)避免陽光直射。   操作時環(huán)境溫度應(yīng)在15℃-40℃之間,環(huán)境濕度在15%-85%之間。   操作電壓應(yīng)保持穩(wěn)定。   操作環(huán)境空氣清潔,避免水汽,煙塵。   保持干燥、干凈、水平的工作臺面,以及足夠的操作空間。
  酶標(biāo)儀用于檢測鈣離子通路主要通過兩種方式:1,熒光法。化合物與細(xì)胞膜上離子通道結(jié)合后,改變離子通道狀態(tài),通道打開,鈣離子進(jìn)入細(xì)胞。進(jìn)入細(xì)胞后與細(xì)胞內(nèi)鈣離子熒光指示劑結(jié)合,發(fā)出熒光后酶標(biāo)儀捕獲,熒光強度與進(jìn)入細(xì)胞的鈣離子含量成正比。熒光指示劑多用FLuo3,F(xiàn)luo3-AM是一種可以乙酰甲酯衍生物,可以穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞,進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切成FLuo3并滯留在細(xì)胞內(nèi),鈣離子進(jìn)入細(xì)胞后與之結(jié)合,會發(fā)出較強的熒光。2,發(fā)光法。水母發(fā)光蛋白復(fù)合物(Aequorin)由22kDa的水母蛋白(Apoaequorin protein)、分子氧和底物腔腸素組成。只有當(dāng)鈣離子(Ca2+)與該復(fù)合物結(jié)合后,腔腸素才能被氧化生成高能量產(chǎn)物Coelenteramide,同時釋放出CO2和藍(lán)色熒光(~466 nm)。正是此Ca2+依賴性的反應(yīng)過程(見圖1),使得腔腸素非常適用于監(jiān)測活細(xì)胞內(nèi)鈣離子水平。與常規(guī)的熒光鈣離子指示劑相比,其主要具有以下幾個優(yōu)點,1)能檢測較大范圍的鈣濃度 – 從0.1 μM至 >100μM;2)樣品無自體熒光,背景熒光低于使用熒光鈣離子指示劑;雖然信號比使用熒光鈣離子指示劑弱,但是通過成像儀器可以得到更高的信噪比,因此具有更高的靈敏度。3)水母發(fā)光蛋白復(fù)合體能夠穩(wěn)定維持在細(xì)胞內(nèi),使其能夠進(jìn)行數(shù)小時至數(shù)天的鈣離子監(jiān)測。

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