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PCR儀的維護(hù)應(yīng)與其維護(hù)相互配合

更新時(shí)間:2020-02-18      點(diǎn)擊次數(shù):997
        PCR儀利用DNA聚合酶對(duì)特定基因做體外或試管內(nèi)In Vitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶進(jìn)行專一性的連鎖復(fù)制。目前,常用的技術(shù),可以將一段基因復(fù)制為原來(lái)的一百億至一千億倍。根據(jù)DNA擴(kuò)增的目的和檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn),可以將PCR儀分為普通PCR儀,梯度PCR儀,原位PCR儀,實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀四類。
  一、實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng):
  盡管擴(kuò)增序列的殘留污染大部分是假陽(yáng)性反應(yīng)的原因,樣品間的交叉污染也是原因之一。因此,不僅要在進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)是謹(jǐn)慎認(rèn)真,在樣品的收集、抽提和擴(kuò)增的所有環(huán)節(jié)都應(yīng)該注意:
  1.戴一次性手套,若不小心濺上反應(yīng)液,立即更換手套;
  2.使用一次性吸頭,嚴(yán)禁與PCR產(chǎn)物分析室的吸頭混用,吸頭不要長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中,避免氣溶膠的污染;
  3.避免反應(yīng)液飛濺,打開反應(yīng)管時(shí)為避免此種情況,開蓋前稍離心收集液體于管底。若不小心濺到手套或桌面上,應(yīng)立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面;
  4.操作多份樣品時(shí),制備反應(yīng)混合液,先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好,然后分裝,這樣即可以減少操作,避免污染,又可以增加反應(yīng)的精確度;
  5.加入反應(yīng)模板,加入后蓋緊反應(yīng)管;
  6.操作時(shí)設(shè)立陰陽(yáng)性對(duì)照和空白對(duì)照,即可驗(yàn)證PCR反應(yīng)的可靠性,又可以協(xié)助判斷擴(kuò)增系統(tǒng)的可信性;
  7.盡可能用可替換或可高壓處理的加樣器,由于加樣器較容易受產(chǎn)物氣溶膠或標(biāo)本DNA的污染,建議使用可替換或高壓處理的加樣器。
  如沒(méi)有這種特殊的加樣器,至少PCR操作過(guò)程中加樣器應(yīng)該,不能交叉使用,尤其是PCR產(chǎn)物分析所用加樣器不能拿到其它兩個(gè)區(qū);
  8.重復(fù)實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證結(jié)果,慎下結(jié)論。
  二、定期運(yùn)行維護(hù)
  1.PCR儀器需要定期檢測(cè),視制冷方式而定一般半年至少一次。
  2.PCR反應(yīng)的要求溫度與實(shí)際分布的反應(yīng)溫度是不一致的,當(dāng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)各孔平均溫度差偏離設(shè)置溫度大于1~2℃時(shí),可以運(yùn)用溫度修正法糾正PCR實(shí)際反應(yīng)溫度差。
  3.PCR反應(yīng)過(guò)程的關(guān)鍵是升、降溫過(guò)程的時(shí)間控制,要求越短越好,當(dāng)PCR儀的降溫過(guò)程超過(guò)60s,就應(yīng)該檢查儀器的制冷系統(tǒng),對(duì)風(fēng)冷制冷的PCR儀要較*地清理反應(yīng)底座的灰塵;對(duì)其他制冷系統(tǒng)應(yīng)檢查相關(guān)的制冷部件。
  4.一般情況如能采用溫度修正法糾正儀器的溫度時(shí),不要輕易打開或調(diào)整儀器的電子控制部件,必要時(shí)要請(qǐng)專業(yè)人員修理或利用儀器電子線路詳細(xì)圖紙進(jìn)行維修。

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